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临床检验技师《临床免疫学》2017年知识梳理
1.免疫组织化学技术：又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。
种类：荧光免疫组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金(银)组织化学技术、亲和组织化学技术、免疫电竞组织化学技术等
基本过程：1.抗原的提取和纯化2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化3.将标记物与抗体结合形成标记抗体4.标本的处理与制备5.抗原抗体免疫学反应以及标记物呈色反应6.观察结果
2.非标记抗体酶免疫组织化学染色
【技术类型】
(一)酶桥法
抗酶抗体作为第三抗体，通过桥抗体(第二抗体)将特异性识别组织抗原的第一抗体连接，形成酶联的 抗原-抗体 复合物，加底物显色。
本法较酶标法的敏感性有所提高，但操作分四步较为复杂。
(二)过氧化物酶抗过氧化物酶酶(PAP)法
是在酶桥法的基础上加以改良。本法首先将酶桥法的第三抗体(抗酶抗体)与酶组成可溶性复合物(PAP复合物)。该复合物由两个抗酶抗体和三个过氧化物酶分子组成，呈五角形结构，非常稳定。
通过桥抗体(第二抗体)，将特异性识别组织抗原的第一抗体与PAP复合物的抗酶抗体连接起来，此时要求特异性第一抗体与第三抗体的动物种属相同
(三)双桥PAP法
该法建立在PAP法的基础上。其基本原理是在PAP法中通过两次连接桥抗体和PAP复合物而建立起来的，通过双桥可结合更多的PAP复合物于抗原分子上，以增强敏感性。这种放大方式重复使用桥抗体，使桥抗体与PAP复合物中抗酶抗体的未饱和Fc段结合，或桥抗体与特异性第一抗体未饱和的Fc段结合。如此对抗原有明显放大作用，对于组织细胞微量抗原的检测又实用价值。
(四)碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APAAP)法
因部分组织细胞内含内源性过氧化物酶，限制了HRP的广泛应用，需选用其他酶免疫组织化学反应。本法是用碱性磷酸酶(ALP)代替HRP建立的碱性磷酸酶(ALP)-抗碱性磷酸酶(AAP)法，简称APAAP。其技术要点与PAP法相似。
【常用酶及显色底物】
最常用的是辣根过氧化物酶(HRP)，常用的供氢体有二氨基联苯胺(DAB)，反应产物呈棕色。其他有：氨基乙基卡巴唑(AEC)，反应产物为橘红色;4-氯-1-萘酚，反应产物为灰蓝色。
碱性磷酸酶为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色：①偶氮偶联反应，最终与重氮化合物作用生成不溶沉淀，如快蓝为深蓝色，快红为红色。②靛蓝四唑反应，最终形成紫蓝色不溶沉淀。
3.亲和组织化学类型：生物素-亲和素法(亲和素-生物素-过氧化酶复合物技术ABC、桥联亲和素-生物素技术BRAB、标记亲和素-生物素技术LAB)、葡萄球菌...
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卫生资格检验技师《临床免疫学》2017年备考重点
1.外周血单个核细胞：包括淋巴细胞和单核细胞，其比重在1.075~1.090，而红细胞和多核白细胞比重在1.092左右。分离淋巴细胞以密度1.077±0.001的分层液为佳。
分离方法：Ficoll分离液法，是一种单次差速密度梯度离心法。聚蔗糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液，商品名Ficoll。
2.淋巴细胞分离方法：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、Percoll分离法
T、B细胞和T细胞亚群的分离方法：磁性微球分离法、荧光激活细胞分离仪分离法
3.淋巴细胞分类：T细胞、B细胞、NK细胞
4.辅助性T细胞的典型表面标志：CD3+CD4+CD8+。(Th1主要分泌IL-2，IFN-γ或TNF-β等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应;Th2主要分泌IL-4/5/6/10等辅助体液免疫、参与速发型超敏反应)
细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+。(CD3+CD8+CD30-可认定为Tc1细胞;CD3+CD8+CD30+可认定为Tc2)
调节性T细胞：自然存在的，其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ (最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3)
成熟B细胞均表达CD19，B1细胞CD19+CD5+，B2细胞CD19+CD5-，B1主要分布在腹腔和胸腔，与机体的免疫调节，自身免疫病及B细胞源性肿瘤密切相关。B2主要分布在周围免疫器官，是执行体液免疫的主要细胞。
NK细胞的典型标志：CD3-CD16+CD56+。
单核-巨噬细胞的典型表面标志为CD14。
人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达MPS、T/B/NK细胞的典型表面标志(CD14/3/19和CD20/16/56)。
5.T细胞增殖试验有：形态学检查法，3H-TdR掺入法、MTT比色法
6.溶血空斑实验(PFC)：将经SRBC免疫过的小鼠脾细胞与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑，每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数目。
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2017年检验技师《临床免疫学》考试考点
1. 免疫防御(对外)免疫自稳(防自身免疫病)免疫监视(防肿瘤)。
2. 标记免疫技术应用最多，自动化是免疫学检验发展趋势。
3. 抗原的表位至少有二种方式：顺序或线性表位，三维结构的构象表位。
4. 天然抗原绝大多数是胸腺依赖性抗原(TD-Ag)。超抗原被T细胞识别时虽然要与MHCⅡ类分子结合，但不受Ⅱ类分子的限制，可以直接活化T细胞而且效率高。抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL是抗原结合部位，CL，CH1是遗传标记所在，CH2有补体结合点，CH5能固定组织细胞，CH3和CH4还参加Ⅰ型变态反应。免疫学中常用木瓜酶和胃蛋白酶。
5. 免疫球蛋白的血清型有：同种型(正常个体都有)同种异型(只存在同种的某些个体中)独特型(某一个体独有的。独特性网络在免疫应答的调控中起重要作用)。
6. 天然IgG分子无活性。IgM(五聚体，天然凝集素和冷凝集素，是B细胞膜上主要表面膜Ig)激活补体能力最强，IgG(单体，电泳最慢，再次免疫应答的主要抗体)至少要两分子。0.1mol/L 2巯基乙醇能破坏IgM但不破坏IgG，可以区分它们。
7. 母乳中的分泌型IgA提高了婴儿出生后4～6个月内的局部免疫屏障，常称为局部抗体。
8. 人类重链基因位于14号染色体上，K基因位于第二号染色体上。
9. 参与补体激活经典途径的固有成份按先后为C1，C2……C9，C1由C1q，C1r，C1s，三种组成。灭活的补体在片在符号前加i，有酶活性的上加一横。
10. 补体大多是糖蛋白多属β球蛋白，C1q，C8是γ蛋白。C1s，C9是α球蛋白。C3含量最多，C2含量最少。替代途经的激活物主要是细胞壁成分。
11. 补体清除免疫复合物的方式：吞噬调理，免疫粘附，免疫复合物抑制。
12. 编码人C4，C2，B因子的基因在第六染色体短臂上与MHC的基因相邻，命名为Ⅲ类组织相容性基因。产生补体主要是肝脏主要是巨噬细胞。
13. 已发现的归巢受体有：CD44，LFA-1，VLA-4，MEL-14/LAM-1等。CD2表达于全部T细胞和NK细胞。CD3表达在全部T细胞，CD4(辅助性T细胞)/CD8(细胞毒性T细胞)相互关联但意义不同是T细胞亚群的表面标志。
14. SIg的功能是作为B细胞表面的抗原受体可与相应抗原特异性结合并将抗原内摄处理。MHCⅡ是辅佐细胞(AC)递呈抗原的必须物质是辅佐细胞(有单核吞噬，树突状，B细胞)的标志。明确的白介素有15个，IL-2主要由T细胞(CD4+)受抗原或丝裂原刺激后产生，15KD，113糖蛋白。
15. Ⅱ型干扰素又称免疫干扰素或IFNγ，主要由T细胞产生。肿瘤坏死因子：TNFα：由细菌脂多糖活化的单核细胞产生引起出血坏死也称恶病质素，TNFβ：由抗原或丝裂原刺激的淋巴细胞产生有肿瘤杀伤和免疫调节功能又称淋巴毒素。
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